Comment cloner un champignon frais sur agar ? [Tutoriel]

Le terme « clonage de champignon » évoque souvent des images de laboratoires ultra-modernes, de chercheurs en blouses blanches et de matériel scientifique coûteux. Cependant, cloner un champignon est bien loin de ces scénarios futuristes. Il est tout à fait possible de reproduire vos variétés de champignons favorites depuis le confort de votre maison, sans avoir recours à des outils onéreux.

Dans cet article, je vous dĂ©voile les raisons pour lesquelles le clonage de champignons est intĂ©ressant et je vous guide Ă  travers un tutoriel dĂ©taillĂ© pour le rĂ©aliser sur de l’agar.

Que signifie cloner un champignon?

Lorsque vous clonez un champignon, vous crĂ©ez une copie identique d’un champignon particulier en utilisant un morceau de tissu vivant du corps fructifĂšre du champignon. On utilise le terme « clonage » pour dĂ©crire les diffĂ©rents processus utilisĂ©s pour produire des copies gĂ©nĂ©tiquement identiques d’un organisme particulier, dans notre cas, un champignon. On appelle cette copie gĂ©nĂ©tiquement identique un clone.

Alors, si l’on regarde plus large, le fait d’ensemencer du mycĂ©lium sur grain ou de la culture liquide Ă  partir d’un champignon frais est Ă©galement une forme de clonage, mais plus risquer.

Dans cet article, on va se concentrer sur le clonage de champignon frais sur de l’agar.

Pourquoi cloner des champignons?

Le clonage vous permet donc de crĂ©er une copie identique d’un champignon avec des caractĂ©ristiques souhaitables comme le rendement, la vitesse de croissance, la couleur, la rĂ©sistance aux maladies, etc. Vous pouvez cloner n’importe quel excellent champignon comestible et mĂ©dicinal sauvage que vous trouvez dans votre rĂ©gion pour en conserver une copie. Et bien sĂ»r, vous pouvez aussi cloner des champignons que vous avez cultivĂ©s ou mĂȘme des champignons frais achetĂ©s en magasin.

Bien que vous puissiez collecter des spores de champignons pour la culture, ce serait risquĂ©. Car faire pousser des champignons Ă  partir de spores donne des rĂ©sultats variables. Les hyphes primaire poussent Ă  partir des spores de champignons, et lorsqu’ils fusionnent pour crĂ©er du mycĂ©lium secondaire, ils crĂ©ent de nouvelles souches. Une nouvelle souche aura des traits similaires au champignon parent, mais elle peut Ă©galement avoir des caractĂ©ristiques diffĂ©rentes, la rendant moins dĂ©sirable.

Cloner des champignons est plus rapide que de les cultiver Ă  partir de spores et c’est aussi plus simple, car les souches produites Ă  partir de spore doivent-ĂȘtre tester avant d’ĂȘtre mise en culture Ă  grande Ă©chelle.

Meilleurs champignons Ă  cloner

Alors sachez que vous pouvez classer les champignons selon la maniĂšre dont ils se nourrissent.

Les quatre types les plus courants de champignons sont les saprophytes, les parasites, les mycorhiziens et les endophytes. Parmi ceux-ci, les meilleurs champignons Ă  cloner sont les champignons saprophytes qui poussent sur des matiĂšres organiques mortes et en dĂ©composition dans la nature. Et certains champignons saprophytes de culture sont plus faciles Ă  cloner que d’autres, notamment :

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En faite, tous les champignons qui sont relativement charnus, car il nous faudra par la suite prélever leur chair.

Tutoriel : Comment cloner des champignons avec de l’agar ? Étape par Ă©tape

Cloner un champignon est plus simple qu’il n’y paraĂźt et consiste essentiellement Ă  prĂ©lever un morceau de tissu de champignon et Ă  le placer sur un milieu de culture riche en nutriments Ă  base d’agar. La difficultĂ© est de s’assurer que le tissu et le milieu de culture restent non contaminĂ©s. Il existe plusieurs façons de cloner des champignons, mais utiliser de l’agar est l’une des meilleures mĂ©thodes pour Ă©viter et voir la contamination.

Voici les Ă©tapes Ă  suivre pour cloner des champignons avec de l’agar :

Étape 1 : Rassemblez les fournitures

Avant de commencer, vous devez rassembler tout le matĂ©riel nĂ©cessaire :

  • Une boite de pĂ©tri Ă  base d’agar : Cela sera le milieu nutritif pour le champignon. Vous pouvez les fabriquer vous-mĂȘme avec ce tutoriel ou bien vous pouvez en acheter des prĂ©s-coulĂ©es et stĂ©rilisĂ©es sur internet.
  • Un sporophore de champignon : C’est donc la matiĂšre biologique que l’on va utiliser pour ensemencer notre agar. PrĂ©fĂ©rer des champignons jeunes et charnus si possible pour augmenter vos chances de rĂ©ussite. Si possible, rĂ©coltez-le juste avant la manipulation, bien qu’il soit possible de le conserver 48h au frigo. Plus vous le conservez longtemps, plus le risque de contamination augmente.
  • Une hotte Ă  flux laminaire, un bec Bunsen, ou au minimum une SAB (still air box) : Il s’agit de matĂ©riel pour crĂ©er un environnement stĂ©rile pour votre culture de champignons. Travailler avec l’un de ces Ă©quipements augmentera considĂ©rablement vos chances de rĂ©ussite.
  • De l’alcool : Pour dĂ©sinfecter le champignon
  • Un scalpel : pour prĂ©lever un morceau du sporophore
  • Un briquet tempĂȘte ou une lampe Ă  alcool : pour stĂ©riliser la lame du scalpel
  • Des gants : pour rĂ©aliser la manipulation de maniĂšre aseptique.
  • Parafilm ou ruban adhĂ©sif : pour refermer la boite de pĂ©tri aprĂšs l’ensemencement et Ă©viter les contaminations durant l’incubation.
  • Marqueur permanent : pour noter les informations pertinentes sur la boite de pĂ©tri, qui nous permettrons de la reconnaitre.

Étape 2 : PrĂ©parez Votre Espace de Travail

Lors du clonage de champignons, un environnement de travail propre et stérile est essentiel pour réussir.

Assurez-vous de bien nettoyer et désinfecter les surfaces de travail devant la hotte à flux laminaire ou autour de votre espace de manipulation. Il faudra également nettoyer vos mains, le scalpel et tous les autres outils avant de commencer.

Étape 3 : Nettoyez et ouvrez le champignon

Tout d’abord, vous devez nettoyer votre corps fructifĂšre de champignon avec un chiffon ou une serviette en papier imbibĂ© d’alcool.

Essuyez soigneusement l’extĂ©rieur du champignon, car il est trĂšs probablement couvert de contaminants qui pourraient finir dans la boĂźte d’agar. Une fois le champignon propre, vous devez l’ouvrir devant la hotte Ă  flux laminaire, mais en aval de la boĂźte d’agar.

La surface du champignon doit bien ĂȘtre nettoyer avant d'ĂȘtre clonĂ©
Nettoyage de la surface externe du champignon

DĂ©chirez le fruit si possible, sinon entaillez-le lĂ©gĂšrement en surface pour l’ouvrir au lieu de le couper pour Ă©viter la contamination.

L’intĂ©rieur d’un champignon dĂ©chirĂ© est naturellement stĂ©rile et contient des cellules propres et fertiles de mycĂ©lium de champignon.

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Étape 4 : StĂ©rilisez votre scalpel Ă  la chaleur

Lors du clonage, vous utiliserez un scalpel pour prĂ©lever un Ă©chantillon de tissu sur le champignon. Ce scalpel doit ĂȘtre stĂ©rilisĂ© Ă  la flamme jusqu’à ce qu’il soit rougeoyant. Il faut stĂ©riliser le scalpel entre chaque transfert de tissu.

Personnellement, j’utilise un bacti-cinĂ©rator, mais vous pouvez Ă©galement utiliser un briquet-tempĂȘte ou une lampe Ă  alcool. Assurez-vous que le scalpel est refroidi avant de retirer le tissu du champignon, car la chaleur pourrait tuer le prĂ©lĂšvement.

La stérilisation du scalpel permet d'appliquer un matériel inertie de contaminant pour le prévÚlement
Stérilisation du scapel au bacti-cinérator

Une façon de refroidir le scalpel est de le tremper dans le milieu d’agar. Pour ce faire, soulevez le couvercle de la boĂźte de pĂ©tri, trempez la lame dans l’agar, et remettez rapidement le couvercle. Vous entendrez un grĂ©sillement audible lorsque la lame se refroidit.

Vous pouvez Ă©galement le laisser refroidir dans le courant d’air de la hotte Ă  flux laminaire.

Étape 5 : PrĂ©lever et TransfĂ©rer le tissu

Tout le corps fructifĂšre du champignon est constituĂ© de mycĂ©lium dense, et vous pouvez prĂ©lever du tissu pour le clonage de n’importe quelle partie du champignon. Cependant, certaines zones sont meilleures pour le clonage que d’autres.

Lorsqu’il s’agit de rĂ©colter des cellules reproductrices, les meilleures parties Ă  utiliser sont :

  • La partie charnue en bas du pied du champignon
  • Le haut du pied, juste sous le chapeau
  • Au niveau du chapeau, prĂšs des lamelles

 Il vaut mieux ne pas cloner en utilisant des lamelles sous le chapeau, car elles sont difficiles à nettoyer et contiennent souvent des spores qui pourraient germer et vous donner une souche différente.

Un morceau de 5mm au maximum est essentiel pour un clonage réussit
PrĂ©lĂšvement d’un morceau du sporophore

Retirez un morceau de mycĂ©lium en coupant un petit morceau de tissu de 3 x 3 mm environ. Empalez le tissu sur le scalpel, dĂ©placez-le vers la plaque d’agar, retirez le couvercle et placez le tissu sur l’agar. Puis refermez immĂ©diatement la boĂźte de PĂ©tri.

Utiliser plus d’un morceau est facultatif, et beaucoup de myciculteurs ne placent qu’un Ă©chantillon de tissu par plaque d’agar. Mais avoir plusieurs morceaux de tissu augmente les chances de rĂ©ussite, car tous les Ă©chantillons ne sont pas toujours viables.

Étape 6 : Scellez et incubez l’agar

Scellez vos plaques d’agar inoculĂ©es avec du Parafilm ou du ruban adhĂ©sif et notez-les avec l’espĂšce et la date d’inoculation. Le Parafilm est idĂ©al, car il permet aux plaques d’agar de respirer tout en maintenant une Ă©tanchĂ©itĂ© parfaite.

Une fois réaliser la boite de pétri cloner va en incubation pour quelque jours
Boite de pĂ©tri prĂȘte pour l’incubation

Placez ensuite les plaques d’agar scellĂ©es en incubation, Ă  une tempĂ©rature Ă  24°C. Au bout de 2 Ă  3 jours, vous devriez observer le mycĂ©lium qui commence Ă  se dĂ©velopper. La fin de la colonisation dĂ©pend de la souche et du milieu d’agar, compter 7 Ă  10 jours.

Si votre plaque ne contient que du mycĂ©lium, et bien bravo vous avez rĂ©ussi votre clonage ! Il peut par la suite ĂȘtre mis en stockage au frigo durant quelques semaines ou bien utilisĂ© immĂ©diatement, si besoin.

Le clonage est un savoir faire important pour tout myciculteur qui souhaite progresser
Un clonage Ă  J+7

Conclusion

Que vous souhaitiez reproduire une espÚce sauvage fascinante ou copier votre champignon cultivé préféré, le clonage est une compétence précieuse à apprendre. Vous pouvez également appliquer le clonage à du mycélium sur grain ou encore à la culture liquide, mais attention les contaminations sont plus probables avec ces méthodes. Je vous souhaite de nombreux clonages à succÚs pour vos prochaines manipulations de myciculture.

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Merci d’avoir lu cet article pour apprendre Ă  cloner un champignon. S’il vous a plu, n’hĂ©sitez pas Ă  le partager ou le commenter :).

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